将纯净的蒸馏水注入比色皿中，把其中吸收最小的比色皿的吸光度置为零，并以此为基准，测出其它比色皿的相对吸光度。测定比色液时，应将其吸光度减去比色皿的吸光度。同一组比色皿相互间的差异应小于测定误差，在测定同一溶液时，吸光度差值应小于0.5％ ，否则应对差值进行校正。
比色皿的光程长度也需校正，校正时可将吸光度约为0.4的溶液分别注入校正皿和具有准确光程长度的标准比色皿中，测定吸光度。以标准比色皿的吸光度为1.00，求出校正比色皿吸光度的相对值作为该比色皿的校正系数。测定比色液时，可将所测得的吸光度乘以该皿的校正系数以得到实际吸光度值。
使用时注意事项
1.拿取比色皿时,只能用手指接触两侧的毛玻璃,避免接触光学面。
2.不得将光学面与硬物或脏物接触。盛装溶液时,高度为比色皿的2/3处即可,光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附,然后再用镜头纸或丝绸擦拭。
3.凡含有腐蚀玻璃的物质的溶液,不得长期盛放在比色皿中。
4.比色皿在使用后,应立即用水冲洗干净。必要时可用1∶1的盐酸浸泡,后用水洗干净。
5.不能将比色皿放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘烤。
6.使用前将比色皿在2%的硝酸溶液中浸泡24小时，然后用水，蒸馏水依次冲洗干净，擦干。
7.比色前将各个比色皿中装入蒸馏水，在比色波长下进行比较，误差在±0.001吸光度以内的比色皿选出4-8个进行比色测定，可避免因比色皿差异造成测量误差.
8.比色皿中的液体，应沿毛面倾斜，慢慢倒掉，不要将比色皿翻转，直接口向下放在干净的滤纸上吸干剩余液，然后用蒸馏水冲洗比色皿内部倒掉（操作同上）避免液体外流，使第2次测量时不用擦拭比色皿，不致因擦拭带来的误差。
